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宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2的相互作用及其对病毒复制的影响 认领
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作者 王亚楠 韩露露 +7 位作者 孙傲颖 姜艳平 崔文 乔薪瑗 唐丽杰 徐义刚 李一经 王丽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第21期1-6,14,175,共8页
为了探究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主细胞热休克蛋白70-2(HSPA2)的相互作用,以及HSPA2表达对TGEV复制的影响,试验利用RT-PCR方法获得猪源HSPA2基因并构建其真核表达载体pCMV-... 为了探究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主细胞热休克蛋白70-2(HSPA2)的相互作用,以及HSPA2表达对TGEV复制的影响,试验利用RT-PCR方法获得猪源HSPA2基因并构建其真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2,通过Western-blot和间接免疫荧光试验检测真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2在IPEC-J2细胞中的表达情况。利用免疫共沉淀(Co-IP)和共定位试验进一步验证TGEV Nsp2和宿主细胞蛋白HSPA2之间是否存在相互作用,利用基因过表达技术在IPEC-J2细胞中过表达HSPA2后接种TGEV,分别测定接种后36,48小时时病毒TCID50。结果表明:真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2能够在IPEC-J2细胞中成功表达,HSPA2与Nsp2之间存在相互作用,并且HSPA2表达量升高后TGEV的TCID50略有升高。说明宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2之间存在相互作用,且HSPA2的表达对TGEV复制具有一定促进作用。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus TGEV) 热休克蛋白70-2(HSPA2) 蛋白互作 病毒复制 免疫共沉淀(Co-IP) 真核表达
联合共检四种猪腹泻病毒的寡核苷酸芯片的构建及应用 认领 被引量:2
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作者 胡靖飞 滑翔 +6 位作者 黄小波 赵玉佳 曹三杰 文心田 文翼平 伍锐 赵勤 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期349-359,共11页
生产中常见仔猪(Sus scrofa)腹泻,造成严重经济损失。本研究建立了联合检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪轮状病毒A群(Porcine rotavi... 生产中常见仔猪(Sus scrofa)腹泻,造成严重经济损失。本研究建立了联合检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪轮状病毒A群(Porcine rotavirus A group, PRoV A)与猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV) 4种猪肠道病毒的寡核苷酸芯片并进行了临床应用。根据PEDV的纤突蛋白(spike, S)、囊膜蛋白(membrane,M)基因、TGEV的S、核衣壳蛋白(nucleocapsid, N)基因、PRoV A的外衣壳蛋白(outer capsid protein, VP7)、非结构蛋白(non-structural protein, NSP4)基因与PDCoV的囊膜蛋白M、N基因设计8对特异性引物,再根据每对引物扩增基因的保守区域设计寡核苷酸探针,并用Cy-3荧光直接标记下游引物5’端进行多重PCR扩增标记样品。研究确定最佳制备和反应参数:100μmol/L探针原液与点样缓冲液比例为1∶2,水合处理10 h,杂交温度为42℃,杂交时间为120 min,以信噪比值(Signal-to-noise ratio, SNR)≥2或信号值>1 300判为阳性。该芯片灵敏性试验表明最低检测量为106copies/μL;特异性实验表明对非目标病原无交叉反应,保存期试验表明制备的芯片置于4℃下可保存至少60 d。用该芯片检测209份临床腹泻样品,结果显示PEDV、TGEV、PoRVA、PDCoV的阳性率分别为68.42%、4.30%、0.95%和2.87%,检测结果与普通逆转录PCR (reverse transcription PCR)一致。本研究构建的寡核苷酸基因芯片为4种仔猪腹泻病原的高通量筛查提供了新技术。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪轮状病毒(PoRV) 猪δ冠状病毒(PDCoV) 寡核苷酸芯片
猪传染性胃肠炎病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立 认领 被引量:4
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作者 焦韵洁 张欣 +5 位作者 朱海鹏 吴小萍 贾存瑜 赵毅 周恩民 穆杨 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1272-1279,1285,共9页
通过对比猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)主要流行毒株的M基因序列,选择其高度保守的区域设计LAMP引物,以羟基萘酚蓝(HNB)为指示剂,建立了1种快速检测TGEV的可视化环介导等温扩增方法。结果显示,采用建... 通过对比猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)主要流行毒株的M基因序列,选择其高度保守的区域设计LAMP引物,以羟基萘酚蓝(HNB)为指示剂,建立了1种快速检测TGEV的可视化环介导等温扩增方法。结果显示,采用建立的方法在恒温水浴锅中约1 h即可完成检测;用该方法检测猪流行性腹泻病毒,猪轮状病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪细小病毒,猪圆环病毒,均不发生交叉反应;以pET-21b-M质粒为模板评价所建立方法的敏感性,最低检测限为3.7×10^3个拷贝,比普通PCR方法高2个数量级;在反应前向反应体系中加入HNB,反应结束后阳性反应管颜色从紫罗兰色变为天蓝色,阴性反应管颜色无变化,且阴阳性管颜色差异明显。用建立的方法对收集的42份临床腹泻样品进行检测,共检测到21份样品阳性。为快速检测TGEV提供方法。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 环介导等温扩增 可视化 检测方法
单链抗体联合治疗仔猪病毒性腹泻病的效果研究 认领 被引量:2
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作者 张凡庆 陈玉雪 +2 位作者 杨亮 龚建培 朱建国 《中国猪业》 2018年第6期43-45,48共4页
猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)和猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)是引起仔猪严重腹泻的两种高度接触性传染病。本文将实验室已有的两株针对TGEV和PEDV的单链抗体(single chain fragment variabl... 猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)和猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)是引起仔猪严重腹泻的两种高度接触性传染病。本文将实验室已有的两株针对TGEV和PEDV的单链抗体(single chain fragment variable,scFv)进行大量表达和纯化,将纯化后的scFv应用到发生疫病的猪场。同时比较了scFv、scFv与奶粉联合使用对仔猪病毒性腹泻的治疗效果,结果证实scFv单独使用后仔猪存活率达到65.0%,scFv与奶粉联合使用后仔猪存活率达到72.7%。本研究探索了一种利用scFv治疗PEDV和TGEV感染的新的给药方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 单链抗体(scFv) 治疗
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PEDV、TGEV、PoRV 3种猪病毒性腹泻病毒的流行现状及控制策略 认领 被引量:14
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作者 王艳丰 张丁华 +2 位作者 李爱心 程征 刘守铉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期518-527,共10页
引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水... 引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征,哺乳仔猪发病率和病死率较高,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发病率较低。特别是自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球的生猪产业造成严重影响,而已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV、TGEV、PoRV的毒株流行变化及防控措施研究的较多,许多新技术、新方法已应用于3种病原的控制。作者基于当前3种病毒的遗传变异分析和流行现状,从饲养管理、免疫预防、中药疗法、干扰疗法、特异疗法及返饲疗法等方面对防控措施进行综述,以期为猪病毒性腹泻的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪轮状病毒(PoRV) 流行现状 防控措施
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单链抗体对猪传染性胃肠炎病毒感染动物保护效果初探 认领
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作者 张凡庆 陈玉雪 +1 位作者 杨亮 朱建国 《中国猪业》 2018年第5期36-40,共5页
猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的一种可导致仔猪严重腹泻的高度接触性传染病。本文研究了一株抗TGEV的单链抗体(scFv)对TGEV的动物保护作用。将携带scFv的质粒进行原核表达... 猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的一种可导致仔猪严重腹泻的高度接触性传染病。本文研究了一株抗TGEV的单链抗体(scFv)对TGEV的动物保护作用。将携带scFv的质粒进行原核表达和纯化,获得了纯化的蛋白。ELISA试验证实scFv与TGEV的特异性反应,空斑试验证实scFv能够抑制病毒的入侵。此外,scFv预先灌服仔猪能够抑制TGEV的感染,给仔猪提供保护。本研究为后续新型抗病毒制剂的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 单链抗体(scFv) 预防
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猪传染性胃肠炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 认领 被引量:2
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作者 王赛 苏菲 +3 位作者 袁秀芳 徐丽华 李军星 余兴龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期13-18,共6页
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,按照常规方法融合、筛选,最终获得2株抗TGEV N蛋白的杂交瘤细胞系,分别命名为2G7和2C2。2株单抗亚类均为Ig G1,腹水的间接ELISA效价均为1∶108。2株杂交瘤细胞连续培养20代... 以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,按照常规方法融合、筛选,最终获得2株抗TGEV N蛋白的杂交瘤细胞系,分别命名为2G7和2C2。2株单抗亚类均为Ig G1,腹水的间接ELISA效价均为1∶108。2株杂交瘤细胞连续培养20代,各代次的上清效价保持不变,均为1∶12 800,说明2株细胞分泌抗体的能力稳定。通过间接免疫荧光发现,制备的2株单克隆抗体能与感染TGEV的细胞发生特异性反应,在胞浆和细胞膜上有亮绿色荧光。结果表明,所制备的2株TGEV N蛋白的特异性单克隆抗体细胞株遗传稳定,分泌的抗体敏感性高,为TGEV病原检测奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 重组N蛋白 单克隆抗体
四川5个规模化养猪场仔猪腹泻的病原学研究 认领
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作者 彭俊杰 陈炜 +4 位作者 高继业 林文婷 徐琳 郭西平 郑强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期172-176,共5页
为了弄清2015年10月份四川5个规模化养猪场仔猪腹泻的病因,试验采用RT—PCR、PCR和常规细菌学的方法,参考GenBank登录序列合成8对PCR引物,分别用于扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的S基因、猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因、猪轮状... 为了弄清2015年10月份四川5个规模化养猪场仔猪腹泻的病因,试验采用RT—PCR、PCR和常规细菌学的方法,参考GenBank登录序列合成8对PCR引物,分别用于扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的S基因、猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因、猪轮状病毒(PRV)的VP4基因、博卡病毒(PBoV)的VP1/VP2基因、猪库布病毒(PKoV)的3D基因,以及肠致病性大肠杆菌(EPEC)K88的faeG基因、K99的fanC基因、987P的fasG基因,其目标DNA片段大小分别为1062bp、467bp、750bp、496bp、323bp、792bp、500bp和551bp。结果表明:SC1猪场病例样本扩增出PKoV3D基因,大小为300bp;SC2、SC3、SC4和SC5猪场病例样本均扩增出PBoVVP1/VP2基因,大小为500bp;其他病原的检测结果均为阴性。经测序和遗传多样性分析表明,PKoV3D基因、PBoVVP1/VP2基因与GenBank登录序列同源性分别在96%和98%以上。说明此次调查的5个猪场存在PBoV和PKoV的感染,但其感染来源和途径还不清楚。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪轮状病毒(PRV) 猪博卡病毒 (PBoV) 猪库布病毒(PKoV) 肠致病性大肠杆菌(EPEC)
猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒和轮状病毒多重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 认领 被引量:2
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作者 刘邓 贾泽颖 +5 位作者 张丹 全炎铭 郭又春 刘莉如 刘修全 陈华林 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第8期45-50,288,289共8页
为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(RV)的多重实时荧光定量PCR方法,试验根据PEDV CV777株、TGEV Purdue P115株全基因序列和RV OSU毒株的VP6基因序列,设计出3对特异性引物及探针... 为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(RV)的多重实时荧光定量PCR方法,试验根据PEDV CV777株、TGEV Purdue P115株全基因序列和RV OSU毒株的VP6基因序列,设计出3对特异性引物及探针,优化反应条件,开展特异性、敏感性、重复性和验证试验。结果表明:该方法的检测最低限为1×10~2拷贝/μL的RNA标准品或1×10~(-2)TCID_(50)/mL的疫苗毒,具有较高的敏感性;变异系数均小于10%,符合统计学要求;利用本试验所建立的方法以及商品化试剂盒对20份临床样品进行检测,符合率为100%。说明本试验建立的方法特异性好,敏感性高,重复性稳定,可用于PEDV、TGEV和RV的鉴别诊断和防控。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 轮状病毒(RV) 检测 多重实时荧光定量PCR
一株仔猪肠道益生菌的鉴定及其体外抗TGEV增殖的初步研究 认领
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作者 宋寒 田璐瑶 +4 位作者 王丽 董伟 袁芄 杨舟 宋振辉 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第9期178-181,184,296共6页
为了研究从健康7日龄仔猪盲肠中筛选出的一株益生菌菌株的体外抗传染性胃肠炎病毒(TGEV)的活性,并初步分析其抗病毒机制,试验采用形态观察、16SrRNA基因扩增,并结合MTT法观察细胞病变情况对其进行了研究。结果表明:分离鉴定的益... 为了研究从健康7日龄仔猪盲肠中筛选出的一株益生菌菌株的体外抗传染性胃肠炎病毒(TGEV)的活性,并初步分析其抗病毒机制,试验采用形态观察、16SrRNA基因扩增,并结合MTT法观察细胞病变情况对其进行了研究。结果表明:分离鉴定的益生菌属于植物乳杆菌(暂命名为LP-1),不同接入顺序的培养上清液对TGEV增殖均有抑制作用,其中培养上清液预处理组效果优于后处理组,培养上清液与TGEV同时作用组效果最差。说明培养上清液对TGEV在体外培养猪睾丸(ST)细胞模型上的增殖能产生抑制作用,并与其不同接入顺序有关。 展开更多
关键词 益生菌 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 分离鉴定 抗病毒作用 初步研究
猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 认领 被引量:2
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作者 李子祥 邵春艳 +6 位作者 徐琦 孙静 姜胜 何海建 吴媛 王晓杜 宋厚辉 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第3期129-133,共5页
针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的保守序列设计引物,以TEGV疫苗毒株为模板,克隆S基因,并构建重组阳性质粒,优化反应体系和扩增条件,建立基于SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、重复性和灵敏度进行分析。... 针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的保守序列设计引物,以TEGV疫苗毒株为模板,克隆S基因,并构建重组阳性质粒,优化反应体系和扩增条件,建立基于SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、重复性和灵敏度进行分析。结果显示:建立的检测方法灵敏度可达10拷贝/μL,标准曲线线性关系良好(r=0.997),扩增效率高,具有良好的特异性和重复性。使用该方法对124份临床疑似TGEV病料进行检测,阳性样本有17份,检测样本的阳性率为13.7%。该方法可用于兽医临床上TGEV的快速检测和流行病学分析。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎 实时荧光定量PCR 特异性 敏感性
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猪传染性胃肠炎病毒TH-98株的遗传变异分析 认领 被引量:2
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作者 秦越 张斯佳 +10 位作者 郝振业 郭田田 李文雪 王亚楠 孙黎 姜艳平 崔文 王丽 徐义刚 唐丽杰 李一经 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第11期52-60,共9页
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH-98株是1998年在黑龙江省哈尔滨市郊区疑似感染TGEV的猪场中分离出来的高致病性毒株。采用RT-PCR以及RACE技术扩增出TGEV的全基因组序列并上传至Gen Bank,将TH-98株同Gen Bank中其他13株TGEV进行比较。结... 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH-98株是1998年在黑龙江省哈尔滨市郊区疑似感染TGEV的猪场中分离出来的高致病性毒株。采用RT-PCR以及RACE技术扩增出TGEV的全基因组序列并上传至Gen Bank,将TH-98株同Gen Bank中其他13株TGEV进行比较。结果表明14株TGEV Nsp1~Nsp16、S、ORF3a、ORF3b、E、M、N和ORF7氨基酸序列同源性分别为98.0%~100%、97.3%~99.8%、91.2%~100%、27.0%~100%、93.8%~100%、99.6%~100%、97.3%~100%和92.3%~100%。与已发表的13株TGEV毒株相比,TH-98株Nsp1~Nsp16、E、N及ORF7基因均无缺失或插入;与Miller M60的M基因相比,TH-98株有6nt的缺失。不同的TGEV株的突变、缺失、插入主要发生在ORF3b和S基因中。进化树分析可知TGEV TH-98与Purdue株亲缘关系较近,同Miller株拥有共同的祖先。TH-98株同近几年分离出的毒株JS2012、TGEV-HX、SHXB全基因序列同源性分别为98.6%、98.8%、99.8%。研究表明,TH-98株与目前流行的TGEV毒株相比没有发生明显的变化。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 全基因序列 克隆 遗传变异
贵州省仔猪病毒性腹泻病原学调查 认领 被引量:4
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作者 张双翔 胡兴义 +3 位作者 唐宇 冉隆仲 李涛 王慧 《贵州畜牧兽医》 2016年第6期8-10,共3页
为了解贵州省仔猪病毒性腹泻病原流行情况,对2013--2015年贵州省7个市(州)采集的35个规模养猪场316份仔猪腹泻粪便样品进行病原核酸检测。结果显示,各地均存在猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(P... 为了解贵州省仔猪病毒性腹泻病原流行情况,对2013--2015年贵州省7个市(州)采集的35个规模养猪场316份仔猪腹泻粪便样品进行病原核酸检测。结果显示,各地均存在猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)感染,PEDV阳性率为62.43%,TGEV阳性率为7.91%,PoRV阳性率为11.76%。不同病原在不同地区呈显著流行趋势,且存在不同程度的混合感染,PEDV与PoRV混合感染率为18.04%,PEDV与TGEV混合感染率为5.06%,TGEV与PoRV混合感染率为3.80%,PEDV、TGEV与PoRV混合感染率为1.90%,近3年主要流行病原为PEDV。为临床防控仔猪病毒性腹泻发生提供了理论依据。 展开更多
关键词 仔猪腹泻 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 病原学调查
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猪病毒性腹泻疫苗研究进展 认领 被引量:1
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作者 岳筠 胡兴义 +3 位作者 唐宇 冉隆仲 李涛 王慧 《贵州畜牧兽医》 2016年第6期23-27,共5页
猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒是当前猪病毒性腹泻的主要病原,临床表现主要为呕吐、水样腹泻、脱水、逐渐消瘦等症状。不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害养猪业的健康发展。疫苗接种是防控猪病毒性腹泻的关键... 猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒是当前猪病毒性腹泻的主要病原,临床表现主要为呕吐、水样腹泻、脱水、逐渐消瘦等症状。不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害养猪业的健康发展。疫苗接种是防控猪病毒性腹泻的关键措施之一,但大量临床试验显示抗体阳性率低,免疫效果不佳。文章针对猪病毒性腹泻疫苗的研究进展进行综述,旨在为临床上预防猪病毒性腹泻提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪轮状病毒 猪传染性胃肠炎病毒 疫苗 研究进展
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猪传染性胃肠炎病毒N蛋白原核表达和间接ELISA检测方法的建立 认领 被引量:3
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作者 郭宏伟 郑鸣 +3 位作者 乔宏兴 马辉 赵绪永 王永芬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2296-2301,共6页
试验构建了pET28a-TGEV-N重组表达质粒,完成TGEV N蛋白的表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,表明表达产物N蛋白可被猪TGEV阳性血清识别。用TGEV N蛋白作为诊断抗原,建立了检测TGEV血清抗体的间接ELISA检测方法,该方法批内... 试验构建了pET28a-TGEV-N重组表达质粒,完成TGEV N蛋白的表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,表明表达产物N蛋白可被猪TGEV阳性血清识别。用TGEV N蛋白作为诊断抗原,建立了检测TGEV血清抗体的间接ELISA检测方法,该方法批内、批间重复试验变异系数均小于5%;检测血清的特异性为100%,假阳性率为0,假阴性率为5%,与7种常见猪病血清无交叉反应。针对临床血清,用该方法检测结果与中和试验结果相比,符合率为100%。该方法能够快速、有效地检出TGEV抗体,重复性和特异性好,为标准化诊断试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白 原核表达 间接ELISA
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猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二重PCR检测方法的建立 认领 被引量:7
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作者 路超 张莉 +2 位作者 王利丽 杨春蕾 韩伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1377-1382,共6页
通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检... 通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检测到TGEV和PEDV,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)等均无扩增,其检测TGEV、PEDV的极限为104拷贝/μL;用该方法对临床收集的68份疑似病毒性腹泻仔猪粪便和肠道组织样本进行检测,结果表明本试验建立的二重PCR方法具有特异性强、灵敏度高等特点,能用于临床诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 二重PCR 诊断
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猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立及在疫苗评价中的应用 认领 被引量:1
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作者 俞正玉 徐向伟 +8 位作者 孙冰 何孔旺 郭容利 杜露平 温立斌 张雪寒 茅爱华 倪艳秀 李彬 《农业科学与技术:英文版》 CAS 2014年第9期1487-1490,共4页
[目的]建立检测猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus.TGEV)的TaqMan荧光定量PCR方法。[方法]根据TGEV基因组中保守的N基因序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有N基因的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。[... [目的]建立检测猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus.TGEV)的TaqMan荧光定量PCR方法。[方法]根据TGEV基因组中保守的N基因序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有N基因的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。[结果]该试验建立的荧光定量PCR方法在10^2~10^10拷贝/μl之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.99以上.扩增效率在90%~110%之间。该方法的检测灵敏度为10拷贝,敏感性较高.而且特异性较好,与猪的其他病毒核酸均无交叉反应;批内和批间的变异系数低于3%.表明该方法的重复性较好。应用该方法可以对疫苗的免疫效力进行定量检测和评价.也可以对临床病料进行检测。[结论]该研究建立的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,可为TGEV的流行病学调查、疫苗开发和发病机制等研蜜檬供可靠的工具。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 TaqMan荧光定量PCR 检测
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猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析 认领 被引量:5
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作者 王劭 朱小丽 +6 位作者 朱晓琳 陈少莺 林锋强 陈仕龙 程晓霞 李兆龙 江斌 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期112-119,共8页
猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其... 猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其原核表达产物的抗原性,参照GenBank中的TGEV全基因序列,设计合成一对扩增TGEV福建(FJ)分离株Ⅳ基因的特异性引物,进行克隆和序列分析,结果表明,TGEV-FJ株Ⅳ基因全长1149bp,编码382个氨基酸(GenBank登录号JQ700302),与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性,氨基酸同源性进行比较分析,N基因核苷酸的同源性为95.4%~99.8%,氨基酸同源性为96.1%~100%。TGEV.FJ株Ⅳ基因克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)中进行表达。SDS—PAGE分析表明,重组蛋白约为68kD,与预期分子量一致;Westemblot分析表明,重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带;以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性,送检20份猪(Susscrofa)TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1-27),间接免疫荧光试验证明,该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原。TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒(TGEV) TGEV-福建(Fujian)分离株 核衣壳蛋白 N基因 原核表达
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广西仔猪腹泻病毒病原流行病学调查 认领 被引量:26
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作者 郭旋 陈静 +7 位作者 刘欢 侯韶毅 龙凤 李莹莹 曾娟 兰家暖 刘芳 黄伟坚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期155-160,共6页
【目的】了解引起广西仔猪腹泻的主要病毒病原及其分子流行病学特点,为其防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR对2011年至2012年7月从广西11个城市的养猪场采集的232份病料进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)... 【目的】了解引起广西仔猪腹泻的主要病毒病原及其分子流行病学特点,为其防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR对2011年至2012年7月从广西11个城市的养猪场采集的232份病料进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)检测和流行病学调查;对部分PEDV阳性病料的M基因进行克隆,并与国内部分省(市)及国外的一些M基因序列进行比对和遗传进化分析。【结果】广西11个城市采集的232份病料中PEDV、PoRV的阳性率分别为37.50%和0.03%,而TGEV均为阴性。对部分PEDV阳性病料进行M基因扩增,获得14条M基因,其核苷酸同源性及推导氨基酸序列同源性分别为97.4%~100.0%和96.0%~100.0%。将扩增获得的14条PEDV M基因与GenBank上发表的40条国内外PEDV M基因进行比对分析,发现有13条同位于一大支上(G1),其中9条与我国2011年分离获得的广东、四川、江苏参考株及泰国2008年分离获得的5条参考株、韩国2007年分离获得的两条参考株同位于G1-1上,4条与我国2011年分离获得的江西、江苏、广东、福建毒株及江苏2004年分离株JS-2004-2 同位于G1-2上。另外一条PEDV M基因(NNA-11)却与其余13条相距较远,位于G2上。【结论】从2011年至今致使广西仔猪腹泻的病毒主要是PEDV,各市均有不同程度感染,且感染全年存在;大部分广西流行毒株与2011年以来我国广东、福建、江苏、江西四省流行毒株的亲缘性较高,与2007年以来泰国、韩国的流行毒株亲缘关系也非常密切,但与我国2006年前分离获得的北方毒株、经典疫苗株、韩国疫苗株相距较远。 展开更多
关键词 仔猪腹泻病 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 流行病学 M基因 广西
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猪传染性胃肠炎病毒诱导ST细胞凋亡的初步研究 认领 被引量:2
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作者 戴美玲 赵晓民 +3 位作者 丁利 许信刚 黄勇 童德文 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2013年第11期19-25,共7页
【目的】探讨猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染猪睾丸细胞(ST细胞)后是否可诱导细胞发生凋亡,并对凋亡的信号通路进行初步探究,为进一步揭示TGEV的致病机制提供理论基础。【方法】用TGEV感染对数生长期的ST细胞,同时设立对照组,在... 【目的】探讨猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染猪睾丸细胞(ST细胞)后是否可诱导细胞发生凋亡,并对凋亡的信号通路进行初步探究,为进一步揭示TGEV的致病机制提供理论基础。【方法】用TGEV感染对数生长期的ST细胞,同时设立对照组,在感染后不同时间取细胞样品,通过细胞形态观察、细胞活性检测、细胞凋亡率检测和细胞内Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性检测及Western blot分析等方法,研究TGEV感染对ST细胞的影响。【结果】TGEV感染可抑制ST细胞生长,并且呈现病毒感染剂量和感染时间的依赖性。倒置显微镜和荧光显微镜观察结果显示,10 MOI(感染复数)的 TGEV感染24 h后,ST细胞出现典型的凋亡特征,细胞皱缩变圆、聚堆,细胞核内染色质固缩。流式细胞仪检测及Caspases活性检测表明,感染TGEV的ST细胞凋亡比例随感染时间的延长而逐渐增加,细胞内Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性逐渐升高。Western blot分析表明,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9无活性的酶原形式随着TGEV感染时间的延长逐渐降解,同时Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化片段逐渐增加。TGEV感染能够促进FasL和Bax的表达而下调Bcl-2的表达。【结论】TGEV感染能够诱导ST细胞凋亡,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9及FasL介导的死亡受体通路和Bcl-2家族调控的线粒体凋亡通路,在调控TGEV感染诱导的细胞凋亡过程中可能起着非常重要的作用。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 猪睾丸细胞(ST细胞) 细胞凋亡
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